logo

Пользовательского поиска

Thursday 15th of November 2018

Эффективная модель получения человеческих индуцированных плюрипотентных стволовых клеток без ДНК-интеграции

Печать E-mail
Рейтинг пользователей: / 0
ХудшийЛучший 
Актуальные темы - Стволовые клетки
Автор: Administrator   
23.08.2013 18:13

 

Получение человеческих индуцированных плюрипотентных стволовых клеток с помощью РНК.

 

Получение человеческих индуцированных плюрипотентных стволовых клеток с помощью РНК. (Рис. Peter Allen, UC Santa Barbara)

 

 

 

 

 

 

 

 

Ученые Школы медицины Калифорнийского университета в Сан-Диего (University of California, San Diego School of Medicine) разработали простой и легко воспроизводимый метод получения человеческих индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ИПСК), основанный на РНК. Результаты их исследования опубликованы в журнале Cell Stem Cell. Новый подход открывает широкие перспективы в использовании ИПСК в научных исследованиях и, возможно, в терапии стволовыми клетками.


Американским ученым удалось разработать гораздо более эффективный, чем основанные на встраивании ДНК, метод. Он позволяет избежать потенциальных проблем с интеграцией и, очевидно, представляет собой более безопасный и простой способ создания ИПСК с точки зрения их будущего клинического использования.

Получение человеческих индуцированных плюрипотентных стволовых клеток открывает широкие возможности в переходе к клиническому использованию методов регенеративной медицины, основанных на собственных стволовых клетках конкретного пациента. Плюрипотентность означает, что эти клетки обладают способностью давать начало любому типу клеток организма. Человеческие ИПСК, как правило, искусственно получаются из не плюрипотентных дифференцированных клеток, таких как клетки глубоких слоев кожи фибробласты, представляющие соединительную ткань, составляющую структурную основу многих других тканей.

ИПСК сохраняют характеристики природных плюрипотентных стволовых клеток, известных как эмбриональные стволовые клетки. Так как развиваются они из собственных клеток пациента, считалось, что их использование в лечебных целях позволит избежать любых иммуногенных реакций. Однако, в зависимости от методов получения, применение индуцированных плюрипотентных стволовых клеток может быть связано со значительным риском, ограничивающим их клиническое применение. Например, использование вирусов – в качестве средства доставки генов для изменения генома дифференцированных клеток – может спровоцировать их раковое перерождение.

Ранее разработанные методы получения ИПСК, позволяющие избежать интеграции ДНК, сложны и неэффективны в воспроизведении. Поэтому исследователи из UCSD сосредоточили свое внимание на альтернативном подходе, основанном на самореплицирующейся РНК. В этом случае необходимость во встраивании генов в ДНК отпадает, при этом метод дает возможность в управляемом режиме сохранять и разрушать РНК, которые достаточно ввести в клетку всего один раз.

Получение человеческих индуцированных плюрипотентных стволовых клеток открывает широкие перспективы в разработке методов лечения целого ряда заболеваний, однако без интегративных ДНК-векторов оно остается проблематичным. Ученые UCSD разработали простой и легко воспроизводимый метод получения ИПСК на основе РНК, в котором используется одиночный синтетический самовоспроизводящийся РНК-репликон (репликативная форма РНК вируса венесуэльского лошадиного энцефалита, VEE-RF RNA), экспрессирующий на стабильно высоком уровня четыре перепрограммирующих фактора (OCT4, Klf4, SOX2 и либо c-MYC, либо GLIS1) до регулируемой деградации РНК. Однократная трансфекция VEE-RF RNA во вновь образованные или взрослые человеческие фибробласты приводит к эффективной генерации ИПСК со всеми признаками стволовых клеток, включая маркеры клеточной поверхности, глобальные профили экспрессии генов и способность in vivo дифференцироваться во все три зародышевых листка. ИПСК, созданные с использованием РНК-репликона, свободны от трансгенов.

 

Получение человеческих индуцированных плюрипотентных стволовых клеток открывает широкие перспективы в разработке методов лечения целого ряда заболеваний, однако без интегративных ДНК-векторов оно остается проблематичным. Ученые UCSD разработали простой и легко воспроизводимый метод получения ИПСК на основе РНК, в котором используется одиночный синтетический самовоспроизводящийся РНК-репликон (репликативная форма РНК вируса венесуэльского лошадиного энцефалита, VEE-RF RNA), экспрессирующий на стабильно высоком уровня четыре перепрограммирующих фактора (OCT4, Klf4, SOX2 и либо c-MYC, либо GLIS1) до регулируемой деградации РНК. Однократная трансфекция VEE-RF RNA во вновь образованные или взрослые человеческие фибробласты приводит к эффективной генерации ИПСК со всеми признаками стволовых клеток, включая маркеры клеточной поверхности, глобальные профили экспрессии генов и способность in vivo дифференцироваться во все три зародышевых листка. ИПСК, созданные с использованием РНК-репликона, свободны от трансгенов. (Рис. Cell Stem Cell)

 

Используя вирус венесуэльского лошадиного энцефалита (Venezuelan equine encephalitis virus, VEE) с удаленными структурными и сохраненными неструктурными белками, ученые добавили четыре перепрограммирующих фактора (OCT4, KLF4, SOX2 и либо c-MYC, либо GLIS1) в только что образовавшиеся или взрослые человеческие фибробласты, проведя однократную трансфекцию репликативной формы (replicative form, RF) РНК вируса.

«Результатом этой трансфекции стала эффективная генерация ИПСК со всеми признаками стволовых клеток», - поясняет руководитель исследования Стивен Доуди (Steven Dowdy), PhD, профессор кафедры клеточной и молекулярной медицины UCSD. «Этот метод отличается высокой воспроизводимостью, эффективностью, не требует интеграции – и он работает».

Новый метод дает хорошие результаты как на молодых, так и на старых человеческих клетках, и это важно, так как пригодные для лечения болезней или создания моделей заболеваний индуцированные плюрипотентные стволовые клетки должны быть получены из клеток людей среднего или пожилого возраста, более склонных к развитию заболеваний, которые ученые пытаются лечить. Кроме того, он позволяет легко заменять перепрограммирующие факторы, добавляет профессор Доуди.

Работа финансировалась Калифорнийским институтом регенеративной медицины (California Institute for Regenerative Medicine) и Национальными институтами здравоохранения (National Institutes of Health) США.

 

 

По материалам

UC San Diego Researchers Develop Efficient Model for Generating Human iPSCs

 

Оригинальная статья:

Naohisa Yoshioka, Edwige Gros, Hai-Ri Li, Shantanu Kumar, Dekker C. Deacon, Cornelia Maron, Alysson R. Muotri, Neil C. Chi, Xiang-Dong Fu, Benjamin D. Yu, Steven F. Dowdy. Efficient Generation of Human iPSCs by a Synthetic Self-Replicative RNA

 

© «Эффективная модель получения человеческих индуцированных плюрипотентных стволовых клеток без ДНК-интеграции». Полная или частичная перепечатка материала разрешается при обязательной незакрытой от индексации, незапрещенной для следования робота активной гиперссылке на страницу Стволовые клетки.

 

Еще о получении индуцированных плюрипотентных стволовых клеток без интеграции ДНК

 

Ученые предлагают безопасный способ перепрограммирования клеток с помощью РНК

 

 

Related Articles:
 

Vinaora Visitors Counter

mod_vvisit_countermod_vvisit_countermod_vvisit_countermod_vvisit_countermod_vvisit_countermod_vvisit_countermod_vvisit_counter
mod_vvisit_counterToday884
mod_vvisit_counterYesterday782
mod_vvisit_counterThis week4797
mod_vvisit_counterLast week5343
mod_vvisit_counterThis month11699
mod_vvisit_counterLast month40524
mod_vvisit_counterAll days4180729

We have: 96 guests, 1 bots online
Your IP: 54.234.228.185
 , 
Today: Ноя 15, 2018

RSS

Новое на LST

Работает на Joomla!. Valid XHTML and CSS.